紫外/可見分光光度計的測定方法

(一)定量分析

一、法

基于朗伯-比爾定律A= εbC，當某-物質(zhì)在一一定波長下e (吸收系數(shù)，可由已知濃度樣品通過測量、計算求得)為-常數(shù)，比色皿的光程也是已知，也是一個常數(shù)，只要在吸收系數(shù)的波長處測定樣品溶液的吸光度值(D值)，然后由下式求得該樣品溶液的濃度或含量:

C=A/εb

二、標準對照法

在同樣條件下，在選定的波長處，分別測定已知濃度標準溶液的吸光度值A(chǔ)標和樣品溶液的吸光度值A(chǔ)樣，然后由下式求得樣品溶液的濃度或含量:

C樣= A樣+ AgxC標
三、標準曲線法(包括K因數(shù)法)

常用的定量分析方法。即在一定波長(λ ma)下測定某max物質(zhì)的標準系列溶液的吸光度作校正曲線，然后測定樣品溶液的吸光度值，由校正曲線求得樣品溶液的濃度或含量。

所配置的標準系列溶液的吸光度應(yīng)在0.1~1.bs范圍內(nèi)，吸收測定的精密度可達0.5%。

注意: UV/Vis的低檢測濃度與吸收系數(shù)、儀器噪聲、基線平直度、光譜帶寬有關(guān)。而檢測濃度則與吸收系數(shù)、儀器的雜散光、光譜帶寬等有關(guān)，吸收系數(shù)與光譜帶寬有關(guān)。

雜散光越小，檢測上限越高。