- 更新時間2021-08-30
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分光光度計是用不連續(xù)的波長采樣反射物體或透射物體的一種測量儀器。由于不同物體分子的結(jié)構(gòu)不同，對不同波長光線的吸收能力也不同，因此，每種物體都具有特定的吸收光譜。能從含有各種波長的混合光中，將每一種單色光分離出來，并測量其強(qiáng)度的儀器叫做分光光度計。
在使用過程中，由于機(jī)械振動、溫度變化、燈絲變形、燈座松動或更換燈泡等原因，經(jīng)常會出現(xiàn)刻度盤上的讀數(shù)與實(shí)際通過溶液的波長不符合的現(xiàn)象，因而導(dǎo)致儀器靈明度降低，影響測定結(jié)果的精度，需要進(jìn)行檢驗(yàn)。
檢驗(yàn)波長準(zhǔn)確度方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測量儀器的吸收峰值, 如果測出的值與濾光片標(biāo)準(zhǔn)值之差超出規(guī)程規(guī)定, 則需要進(jìn)行波長調(diào)節(jié)。
使用分光光度計的步驟與方法:
預(yù)熱儀器：
為使測定穩(wěn)定，將電源開關(guān)打開，使儀器預(yù)熱20min，為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時和在不測定時應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷。
選定波長：
根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器，使指針指示所需要的單色光波長。
固定靈敏度檔：
根據(jù)有色溶液對光的吸收情況，為使吸光度讀數(shù)為0.2～0.7，選擇合適的靈敏度。為此，旋動靈敏度檔，使其固定于某一檔，在實(shí)驗(yàn)過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。
調(diào)節(jié)“0”點(diǎn)：
輕輕旋動調(diào)“0”電位器，使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處（此時，比色皿暗箱蓋是打開的，光路被切斷，光電管不受光照）。
調(diào)節(jié)T=100%：
將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的第一格內(nèi)，有色溶液放在其它格內(nèi)，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉(zhuǎn)動光量調(diào)節(jié)器，使透光度T=100%，即，表頭指針恰好指在T=100%處。
光具有與其波長成反比的一定量的能量。因此，較短波長的光攜帶更多的能量，而較長波長的光攜帶較少的能量。需要特定量的能量來將物質(zhì)中的電子提升到更高的能量狀態(tài)，我們可以將其檢測為吸收。物質(zhì)中不同鍵合環(huán)境中的電子需要不同的特定能量來將電子提升到更高的能量狀態(tài)。這就是為什么在不同物質(zhì)中對不同波長會發(fā)生光吸收的原因。人類能夠看到一系列可見光，從大約380nm（我們看到的紫色）到780nm（我們看到的紅色）。紫外光的波長比可見光短，約為100nm。因此，光可以通過其波長來描述，這在UV-Vis光譜中可用于通過定位與最大吸光度相對應(yīng)的特定波長來分析或識別不同的物質(zhì)（參見下文中UV-Vis光譜的應(yīng)用部分）。
分光光度法是比色法的發(fā)展。比色法只限于在可見光區(qū)，分光光度法則可以擴(kuò)展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。分光光度法則要求近于真正單色光，其光譜帶寬最大不超過3－5nm，在紫外區(qū)可到1nm以下，來自棱鏡或光柵，具有較高的精度。
